Печать страницы

Клинико-иммунологическая эффективность курсового применения биообавки Баксин у больных с вторичным иммунодефицитом, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией


В настоящее время наблюдается неуклонный рост числа больных с непрерывно-рецидивирующими хроническими воспалительными заболеваниями респираторного, желудочно-кишечного и мочеполового трактов, в основе которых лежит вторичный иммунодефицит (ВИД).Как показывают исследования, у этой категории больных выявляются не только признаки иммунной дисфункции, но и маркеры хронической вирусной или другой внутриклеточной инфекции.


Наиболее часто обнаруживают репликацию вирусов герпес-группы, для которых характерна пожизненная персистенция в организме человека.Наиболее известны в клинической практике – герпес-лабиалис (чаще вызывается Herpes Simplex I), герпес-зостер или опоясывающий лишай (Herpes zoster) и генитальный герпес (чаще вызывается Herpes Simplex II).В трансплантологии хорошо известны заболевания и синдромы, вызванные цитомегаловирусом (Cytomegalovirus).Хроническая гепрес-вирусная инфекция, вызванная вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) и ее формы пока еще мало известны врачам общей практики.Проявления герпетической инфекции многолики – от «безобидной» лихорадки (герпес назолабиалис) до генерализованных форм с поражением внутренних органов.Известно также, что ВЭБ ассоциирован с целым рядом онкологических, преимущественно лимфопролиферативных заболеваний, а также с аутоиммунной патологией: «классические ревматические болезни», васкулиты, неспецифический язвенный колит и др.Современные представления о биологии вируса подтверждают участие ВЭБ в перечисленных патологиях.Кроме того, как показывают исследования последних лет, ВЭБ может вызывать хронические активные и стертые формы заболевания по типу хронического мононуклеоза.


Пожизненная персистенция вирусов герпеса в организме хозяина создает постоянную угрозу их реактивации.Как правило, герпес-вирусы сохраняются в клетках, к которым они имеют тропизм, в неактивном состоянии.Индуцированное вирусами, а также другими экза- и эндогенными факторами ослабление иммунной защиты позволяет им размножаться и распространяться в организме хозяина в течение длительного времени.Реактивация, т.е. переход от персистенции к активной репликации – отражает ослабление иммунологического контроля вирусной инфекции.


Исходя из перечисленных свойств герпес-вирусов очевидны трудности в терапии больных, страдающих частыми рецидивами герпес-вирусной инфекции и /или ВИД на фоне постоянной репликации вирусов в организме.Во всем мире продолжается поиск препаратов, подавляющих репликацию вирусов, а также не менее важных для получения долгосрочного клинического эффекта иммунотропных препаратов, восстанавливающих противовирусную защиту организма.


Как показали предшествующие исследования Баксин является антиоксидантом и уменьшает повреждающее действие на клетки и органы свободно-радикальных процессов, активируемых при многих заболеваниях и особенно при бактериальных и вирусных инфекциях.По экспериментальным данным, Баксин восстанавливал число и функциональную активность иммунокомпетентных клеток после облучения.Кроме того, предварительные клинические исследования подтверждают наличие у препарата адаптогенных свойств, выявленных при экспериментальных исследованиях.


В связи с вышеизложенным нами была поставлена цель исследования – изучить клиническую эффективность препарата Баксин, а также его влияние на показатели иммунитета у больных с вторичным иммунодефицитом, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией.


Материалы и методы исследования.


Рандомизированное «двойным слепым методом» изучение эффективности препарата Баксин было проведено на базе клинической больницы № 7 у 48 больных ВИД, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией; 25 пациентов составили основную группу и получали Баксин как монотерапию, 23 - составили группу сравнения.Больные основной и контрольной групп были сопоставимы по основным параметрам, характеризующим пациентов (пол, возраст) и характер заболевания (тяжесть, длительность, наличие осложнений).


У наблюдаемых нами больных ВИД с ХГВИ, включенных в настоящее исследование, были признаки хронического воспаления респираторного тракта, в виде рецидивирующего фарингита, трахеита, в ряде случаев рецидивирующего бронхита, воспалительных процессов в желудочно-кишечном тракте, в том числе на фоне дисбиоза кишечной флоры (как проявления ВИД).


Больные первой группы (основная – 25 человек), получали Баксин 0,120 по 2 капсулы 3 раза в сутки ежедневно в виде монотерапии в течение 28 дней; вторая группа (группа сравнения) – 23 человек получали поливитамины - ундевит в дозе 3 таблетки в сутки.


Иммунологическое и вирусологическое обследование проводили в динамике: до лечения и через месяц от начала лечения.


Исследование иммунного статуса включало определение 7 субпопуляций лимфоцитов: CD5+, CD4+, CD8+, CD72+, CD16+, DR+, CD11b+, соотношения CD4+/CD8+ или так называемого иммунорегуляторного индекса (ИРИ), иммуноглобулинов классов А, М, G, Е, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), функциональной активности антител, определяемой по авидности антител.


Изучение интерферонового статуса включало определение уровня сывороточного интерферона (ИФН), способности лейкоцитов к продукции ИФН-афльфа; (под воздействием вируса болезни Ньюкасла), а также способности продуцировать ИФН-гамма; под воздействием ФГА.Кроме того, изучено влияние курсового применения Баксина на способность лейкоцитов к продукции ИФН под действием наиболее употребимых медикаментозных индукторов его синтеза (дибазол, амиксин, циклоферон и другие).Также проводилось исследование прямого действия Баксина на интерферон-продуцирующие клетки в тесте in vitro.


Состояние системы фагоцитов оценивали в оригинальном хемилюминесцентном тесте по спонтанной активности нейтрофилов, а также по способности активироваться (коэффициент ХЛ) при инкубации их с препаратом Баксин и двумя иммунотропными препаратами (тимоген, циклоферон).


Детекцию ДНК герпес-вирусной инфекции Herpes Simplex virus I, Herpes Simplex virus II, Epstein-Barr virus, Cytomegalovirus проводили с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).Материалом для выделения ДНК служили эпителиальные клетки из зева, соскобов из эрозий и язв ротовой полости, слюна, лейкоциты и лимфоциты периферической крови.В работе были использованы диагностические наборы производства ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ «АмплиСенс» и НПФ «Литех».


Результаты исследования.


Переносимость препарата Баксин.


Переносимость препарата Баксин была хорошей: аллергических реакций у пациентов не наблюдалось, у 1 пациентки с гиперацидным гастритом прием препарата вызывал изжогу, у 2-х пациенток было отмечено усиление запоров (прошло через месяц после окончания приема Баксина).В осенне-зимний период у одной больной на фоне приема Баксина был острый бронхит нетяжелого течения, у 3-х больных ОРВИ, и у одной пациентки после погрешностей в диете – непродолжительное обострение воспалительного процесса в ЖКТ (дуоденит, дискинезия желчного пузыря, колит).


Данные ПЦР-диагностики хронической герпес-вирусной инфекции до и после терапии препаратом Баксин.


Как уже приводилось выше (таблица 1), у подавляющего большинства больных с иммунодефицитом, вошедших в исследование, выявлялись признаки активной репликации вируса Эпштейна-Барр в орофарингиальной области (в основной группе у 22 из 25 больных, в группе сравнения у 15 из 23 больных) и реже в лимфоцитах и лейкоцитах периферической крови.Клинически это проявлялось частым субфебрилитетом, общим недомоганием, мио- и артралгиями, у 12-ти больных основной группы и 10-ти больных группы сравнения наблюдалась картина синдрома хронической усталости.


Хотя по анамнезу более, чем у половины больных обеих групп эпизодически были случаи лабиального герпеса, и реже – генитального герпеса, на момент исследования активная репликация вирусов простого герпеса I и II типов выявлялись реже (в основной группе у 4-х больных, в контрольной – у 2-х больных).У 3-х пациентов основной группы герпетическая инфекция орофарнгеальной области выражалась афтозным стоматитом, фарингитом, у одной пациентки, кроме этого наблюдались признаки генерализации процесса: Herpes Simplex virus II был обнаружен не только в орофарингеальной области, но и в клетках крови, клиническая картина включала в себя субфебрилитет, выраженную слабость, мышечные и суставные боли и ряд других симптомов. Вирус цитомегалии у пациентов, вошедших в исследование обнаружен не был.


Применение препарата Баксин в виде монотерапиии в течение четырех недель у больных ВИД с ХГВИ в 72,2.% случаев (у 15 из 22) больных привело к подавлению размножения ВЭБ в слюне и ротоглотке (таблица 2).У 7 пациентов репликация ВЭБ сохранялась.В основном это были тяжелые больные с ВИД и синдромом хронической усталости (СХУ) 3-й степени тяжести и давностью заболевания от 3 до 20 лет.


В клетках крови ВЭБ был обнаружен у 11 больных основной группы, в том числе у 8 человек вирус был найден одновременно в клетках крови и в слюне.Надо отметить, что у 3-х из 11 человек основной группы полу-количественным ПЦР-методом в клетках крови выявлялась значимая репликация вируса, характерная для обострения процесса, у остальных 8 человек содержание ДНК ВЭБ было ближе к носительству, латентной репликации.


После месячного курса терапии у 3-х больных с высокой степенью репликации вируса в лимфоцитах и лейкоцитах крови наблюдалось существенное ее подавление, кроме того, еще у 2-х пациентов перестала определяться ДНК ВЭБ в клетках крови даже на уровне носительства.


После проведенной терапии Баксином подавление размножения вируса простого герпеса в ротоглотке наблюдалось у 2 из 3-х человек, и была полностью подавлена репликация вируса простого герпеса 2 типа в клетках крови и ротоглотке у тяжелой больной с СХУ.


Таблица 2.  Результаты ПЦР диагностики герпес-вирусной инфекции у больных ВИД до и после лечения Баксином в основной группе(n=25) и группе сравнения (n=23).


 


Сокращения: РГ: слюна, соскобы с зева, слизистой ротоглотки, ротоглотка Лк, Лф – лейкоциты, лимфоциты периферческой крови


* - больные, у которых был высокий уровень репликации ВЭБ в клетках крови


В группе сравнения среди больных, не получавших Баксин и противовирусную терапию, за время наблюдения только в 2-х из 15 случаев отмечено "спонтанное" подавление репликации ВЭБ в слюне и в 1-м из 3-х случаев ВНГ I (HSV-I) в зеве, однако у части больных этой группы герпес-вирусная инфекция стала определяться уже не в одном материале, а в 2 или 3-х (как видно из таблицы 2, увеличилось число больных, у которых определяется ДНК ВЭБ в слюне, несмотря на то, что у 2-х пациентов активная репликация вируса в слюне прекратилась).


Кроме того, у 3-х больных группы сравнения, у которых ДНК ВЭБ в клетках крови определялась только на уровне носительства, при повторном обследовании стала определяться значимая репликация вируса, характерная для обострения процесса и число таких больных в группе сравнения увеличилось до 6 человек (в отличие от основной группы где число таких снизилось с 3-х до нуля).


Таким образом, проведенное исследование показало, что Баксин способствует подавлению герпес-вирусной инфекции у больных ВИД.


В дальнейшем, с учетом полученных данных вирусологического обследования, мы анализировали параметры иммунного, интерферонового статусов и, особенно, противовирусную защиту у ВИД с ХГВИ, не только в основной и контрольной группах, но и в подгруппах с хорошим эффектом, неполным эффектом и отсутствием эффекта от лечения.


Показатели иммунитета у больных с вторичным иммунодефицитом, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией до и после терапии препаратом Баксин.


Основные нарушение иммунного статуса у больных ВИД с с хронической герпес-вирусной инфекцией до терапии препаратом Баксин.


При обследовании больных как основной, так и группы сравнения были обнаружены изменения в системе иммунитета и в интерфероногенезе. Так, почти у половины (от 36% до 50%) больных были существенно повышены уровни IgА, реже IgM в сыворотке крови, а также - ЦИК по сравнению с верхней границей нормы, и соответственно с показателями группы доноров (таблица 3).Содержание IgG у большинства пациентов было в пределах нормы, однако у них преобладала продукция низкоавидных, т.е. функционально неполноценных антител класса IgG (таблица № 3, 4).


В субпопуляциях лимфоцитов в целом наблюдалась тенденция к снижению уровня общих Т-лимфоцитов (CD5+) и Т-хелперов (CD4+), хотя у четверти больных напротив был значительно повышен уровень CD4+лимфоцитов, что может свидетельствовать об их активации.Содержание цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) в целом было близким к нормальным пределам (в основной группе оно уменьшено у 20% больных, однако в группе сравнения уменьшение ЦТЛ отмечалось заметно чаще – у 39.1%).Существенные изменения обнаружены в содержание натуральных киллеров (CD16+): оно было или существенное уменьшено или увеличено, относительно нормальное их число выявлено только у 6 из 25 человек основной группы и у 11 из 23 группы сравнения. У трети больных обеих групп отмечено снижение уровня DR-позитивных лимфоцитов.


У больных ВИД с ХГВИ также были выявлены изменения и в системе интерферона.У 40-30% больных (основной и группы сравнения) отмечалась тенденция к повышению уровня интерферона в сыворотке крови и у части больных была снижена способность к вирус-индуцированной продукции ИФН-альфа.В основной группе несколько чаще встречалась пониженная способность к индуцированной продукции ИФН-гамма, что в определенной степени отражает нарушение функциональной активности Т-хелперов (CD4+) у этих пациентов.


Состояние гуморального иммунитета у больных с вторичным иммунодефицитом, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией после лечения Баксином.


Как видно из таблицы 3, после месячного приема Баксина в среднем по группе уровни IgА и IgM оставались несколько повышенными.


Таблица 3 Содержание иммуноглобулинов классов A, M, G, Е и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией (n=25) до и на фоне лечения Баксином и в группе сравнения (больных, не получавших Баксин, n=23)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


группы доноров), и были ближе к верхним границам нормы.Положительные сдвиги отмечались в содержании IgG у лиц с исходным его понижением. Содержание IgE оставалось нормальным.Также наблюдалась тенденция к снижению повышенного уровня ЦИК.


В группе сравнения (таблица 3) обнаружена тенденция к дальнейшему повышению уровня IgA (повышение выше верхней границы нормы у выявлено у половины пациентов, p<0,05), у части больных сохранялось также повышение уровня IgМ. Наметилась тенденция к уменьшению содержания IgG, значение которого находилось на нижней границе нормы или ниже ее у 35% пациентов группы сравнения.


Таким образом, сохранение репликации герпес-вирусов у больных в группе сравнения сопровождалось нарастанием дисфункции в гуморальном звене иммунитета. Известно, что гуморальный IgA-ответ на вирусную инфекцию не может адекватно ее подавить, а содержание IgG у пациентов группы сравнения снижается, что коррелирует с уменьшением образования циркулирующих иммунных комплексов и соответственно уменьшением противовирусного потенциала гуморального звена иммунитета.


Нам представлялось важным провести анализ параметров иммунного и интерферонового статусов у больных с хорошим эффектом (полным подавлением репликации герпес-вирусной инфекции после лечения Баксином), которые составили подгруппу «А», а также у лиц с неполным эффектом (репликация подавлена не во всех исследуемых материалах) или с отсутствием эффекта от проводимой терапии, которые составили подгруппу «Б».


Таблица 4. Содержание иммуноглобулинов классов A, M, G и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией до и после лечения Баксином в зависимости от клинического эффекта терапии в подгруппах «А» (положительный эффект) и «Б» неполный или отсутствие эффекта)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


*** - достоверное различие между показателями подгрупп «А» и «Б», p<0,05


Такой анализ помогает в понимании как некоторых механизмов действия препарата при хронической вирусной инфекции, так и в определении показаний к назначению Баксина в виде монотерапии.


Также результаты проводимого анализа могут определить перспективные направления в дальнейшем исследовании применения Баксина в сочетанной терапии с другими иммунотропными и/или противовирусными препаратами. Для проведения более углубленного («структурного») анализа больные с неполным эффектом и отсутствием эффекта из-за малого числа наблюдений были объединены в одну подгруппу (подгруппу «Б»).


Как видно из таблицы 4, исходно в подгруппе «Б» (у больных с неполным или с отсутствием эффекта от лечения) был более высокий уровень IgA, чем в подгруппе «А», который сохранился и после лечения. Кроме того, обращает на себя внимание и более низкое содержание ЦИК у больных этой подгруппы, т.е. имеет место «расхождение» между сохраняющимся воспалительным процессом у этих пациентов, по-видимому, на слизистых оболочках и «неадекватным» образованием или нестабильностью циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).


Другой важнейший показатель гуморального звена иммунитета – авидность антител. Как показали наши совместные работы с Гевондян (1997-2000гг.), авидность антител является наиболее «хрупким» параметром гуморального звена иммунитета. Исследование авидности антител у больных ВИД с ХГВИ до лечения выявило ее значительное изменение. Так, оказалось, что у большинства пациентов опытной (около 70%) и контрольной группы (около 80%) снижена продукция высокоавидных, т.е. функционально полноценных антител (таблица 5).У четверти больных основной группы и группы сравнения, кроме того, выявлено повышение титров антител к некоторым бактериальным антигенам.


Таблица 5. Показатели авидности антител у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией (n=25) до и на фоне лечения Баксином и в группе сравнения (больных, не получавших Баксин, n=23)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


**-достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


Таким образом, несмотря на нормальный или повышенный уровень иммуноглобулинов классов А, М и G, у больных ВИД с ХГВИ имела место недостаточность гуморального звена иммунитета.


Однако через 4 недели терапии у большинства пациентов, получавших Баксин, уровень продукции высокоавидных антител восстановился до нормального (таблица 5).


В группе сравнения не выявлено положительной динамики в уровне продукции высокоавидных антител.


Таблица 6. Показатели авидности антител в подгруппах больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией до и на фоне лечения Баксином в зависимости от эффекта терапии


*-


* -достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


*** - достоверное различие между показателями подгрупп «А» и «Б», p<0,05


При анализе подгрупп больных, получавших Баксин, в зависимости от эффекта терапии (таблица 6) оказалось, что у больных с положительным эффектом от лечения (подгруппа «А») титр антител снижается почти до нормы, и что самое главное, восстанавливается до нормы авидность антител.


В тоже время у больных с неполным или отсутствием эффекта от лечения (подгруппа «Б»), хотя повышенные титры антител уменьшаются, другой важнейший показатель – продукция высокоавидных антител возрастает в меньшей степени, чем у больных подгруппы «А».


Таким образом, применение Баксина оказало существенное положительное влияние на одно из ключевых параметров гуморального звена иммунитета – авидность антител.


Содержание основных субпопуляций лимфоцитов у больных с вторичным иммунодефицитом, ассоциированным с хронической герпес-вирусной инфекцией после лечения Баксином.


Как уже упоминалось, до лечения у большей части больных основной и группы сравнения обнаружена дисфункция в Т-звене иммунитета: примерно у 40% пациентов были выявлены уменьшение содержания общих Т-лимфоцитов (CD5+), более, чем у 40% - уменьшение содержания Т-хелперов CD4+ , кроме того, у четверти больных наблюдалось значительное повышение числа CD4+ лимфоцитов. Таким образом изменения в числе Т-хелперов были у 65-70% больных. У многих пациентов выявлено нарушение функциональной активности этих клеток (Т-хелперов CD4+), оцененное по способности к продукции интерферона гамма.


Таблица 7 Содержание субпопуляций лимфоцитов (%) у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией до и после лечения Баксином (в основной группе, n=25)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


**-достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


Также до лечения были обнаружены выраженные изменения в содержании естественных киллеров CD16+, нормальное их содержание было только у 7 из 25 человек основной группы (значительное уменьшение у 7 человек и увеличение у 11 человек) и у 13 больных группы сравнения (уменьшение – у 2-х человек и увеличение - у 8).


Количество лимфоцитов периферической крови у большинства больных основной и группы сравнения было в пределах нормы и в динамике достоверно не изменялось, что позволило нам не приводить данные по абсолютному содержанию (клеток в 1 мкл) субпопуляций лимфоцитов, так как данном случае изменения процентного их содержание полностью отражают изменения абсолютного числа клеток.


После 4-й недели приема Баксина у части больных основной группы отмечалась тенденция к увеличению содержания исходно сниженных общих Т-лимфоцитов (CD5+), но в большинстве случаев не до нормальных значений (в среднем с 67,4+-2,5 до 70,0+-1,3).


Таблица 8 Содержание субпопуляций лимфоцитов (%) у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией, не получавших Баксин (группа сравнения, n=23)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц , p<0,05


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


В среднем у больных основной группы содержание Т-хелперов (CD4+) сохранялось в пределах нормы на уровне показателей здоровых лиц (однако его снижение сохранялось у 8 пациентов). Также выявлена тенденция к увеличению отношения CD4+/CD8+ (за счет уменьшения у 12 из 25 больных числа цитотоксических лимфоцитов, ЦТЛ, о его причинах будет рассмотрено ниже). У 8 человек основной группы уровень ЦТЛ несколько повысился. Надо отметить, что в среднем по группе у больных, получавших Баксин, изменения содержание ЦТЛ CD8+, как и других изучаемых субпопуляций лимфоцитов, после 28 дней терапии были статистически недостоверными, однако наблюдался так называемый эффект стягивания или приближения отклоненных в ту или иную сторону показателей к нормальным величинам.


Содержание естественных киллеров CD16+ у части больных (у 4-х из 7 человек) со значительным их уменьшением восстановилось до нормы, у 11 из 25 больных этой группы сохранилось умеренное повышение уровня (в среднем до 20.0+-3,5 ).


В группе сравнения (таблица 8) положительной динамики в содержании субпопуляций лимфоцитов не наблюдалось, у пациентов с исходно сниженными показателями наблюдалось дальнейшее уменьшение числа общих Т-лимфоцитов CD5+ и Т-хелперов CD4+ (в среднем с 68.9+-2,8 до 66,6+-3,1 и с 33.4 +- 1,8 до 32.3 +- 2,6, соответственно).Сохранялось снижение уровня ЦТЛ CD8+ у 9 из 23 пациентов, у части больных с нормальным их уровнем отмечалось повышение ЦТЛ, по-видимому, как реакция на сохраняющуюся репликацию вирусов.Также выраженные изменения сохранялись в содержании естественных киллеров CD16+, их повышение выявлено уже у 12 из 23 человек группы сравнения.


При анализе особенностей распределения субпопуляций лимфоцитов и их процентного и абсолютного содержания у больных, получавших Баксин, в зависимости от эффекта лечения были получены следующие данные (таблица 9).


До лечения в подгруппе «А» (положительный эффект от терапии) степень иммунной дисфункции в Т-звене иммунитета и системе естественных киллеров была заметно меньше, чем в подгруппе «Б» (неполный эффект или отсутствие эффекта от терапии).Как видно из таблицы 9, содержание общих Т-лимфоцитов (CD5+) и Т-хелперов (CD4+) в подгруппе «А» было больше, чем в подгруппе «Б» (уменьшение числа CD5+ лимфоцитов наблюдалось у 5 из 15 чел, CD4+ лимфоцитов – у 2-х пациентов). В среднем по подгруппе «А» содержание естественных киллеров CD16+ (ЕК CD16+) было в пределах нормы, но у 6 из 15 больных этой подгруппы имело место уменьшение ЕК, а у 4 пациентов - повышение (т.е. изменения числа ЕК было у 10 из 15 человек). Содержание DR -позитивных лимфоцитов и C11b+ клеток в большинстве случаев было в пределах нормы (отклонения наблюдались только у 4-х человек).


Таблица 9 Содержание субпопуляций лимфоцитов (%) у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией до и после лечения Баксином в зависимости от эффекта терапии (в подгруппах «А» и «Б», n=15 и 10, соответственно)


 


* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


**-достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


***-достоверное различие между показателями подгрупп «А» и «Б», p<0,05


После окончания приема Баксина у больных подгруппы «А» наблюдалась тенденция к увеличению содержания общих Т-лимфоцитов (CD5+), Т-хелперов (CD4+), число которых стало близким к показателям здоровых лиц.Также была выявлена тенденция к уменьшению числа ЦТЛ CD8+ (у 10 больных этой группы отмечалось снижение их уровня в большинстве случаев в пределах нормы), что соответственно привело к увеличению так называемого иммуно-регуляторного индекса или отношения CD4+/CD8+.


Уровни остальных субпопуляций лимфоцитов у большинства пациентов этой подгруппы в среднем были в пределах нормы. Отмечалась нормализация числа ЕК CD16+ у 6 человек (у 4-х человек с исходно сниженным уровнем, у 2-х - с повышенным) и нормализация исходно повышенных и сниженных уровней CD11b+ лимфоцитов у 4-х больных подгруппы «А».


В подгруппе «Б» (неполный эффект или отсутствие эффекта от терапии) до лечения содержание общих Т-лимфоцитов (CD5+) и, особенно, Т-хелперов (CD4+), было на заметно более низком уровне, чем в подгруппе «А», также у большинства пациентов имели место изменения (преимущественно повышение) числа ЕК (CD16+) и уменьшение количества DR позитивных лимфоцитов.


После терапии Баксином содержание общих Т-лимфоцитов (CD5+) и, в частности, Т-хелперов (CD4+), осталось на более низком уровне, чем в подгруппе «А».В отличие от динамики содержания ЦТЛ (CD8+) в подгруппе «А», в подгруппе «Б» число ЦТЛ (CD8+) увеличилось у 7 из 10 человек, что соответственно привело к уменьшению отношения CD4+/CD8+.Также повысилось содержание естественных киллеров (CD16+) и C11b+ клеток у большинства пациентов этой подгруппы.


Сравнивая особенности клиники заболевания у больных в подгруппах «А» и «Б» можно отметить, что степень иммунной дисфункции в определенной мере ассоциировала с большей клинической тяжестью пациентов, включая продолжительность заболевания, наличие и степень тяжести СХУ, симптомы герпес-вирусной инфекции.


При анализе показателей субпопуляций лимфоцитов в подгруппе «Б» и контрольной группе, оказалось, что, несмотря на сохранение в той или иной степени вирусной репликации у больных подгруппы «Б», получавших Баксин, параметры иммунного статуса не ухудшаются, нет дальнейшего снижения общих Т-лимфоцитов, Т-хелперов, а повышение уровня субпопуляций лимфоцитов, прямо ответственных за противовирусную защиту (ЦТЛ CD8+, ЕК CD16+) можно рассматривать как позитивный результат терапии Баксином.


Состояние интерферонового статуса у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией до и после лечения Баксином.


Как уже упоминалось выше, для большинства больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией характерны нарушения в системе интерфероногенеза. Так в основной группе более чем у 40% (10 из 23 чел.– 43.5%) больных обнаружено повышение уровня сывороточного интерферона (в среднем по группе 7.7+/- … при норме 4 и менее, у больных с повышением этого показателя - в среднем до 14.4 +/- 3,2). В группе сравнения повышение сывороточного ИФН было у трети пациентов.


У четверти больных основной группы и у 40% больных группы сравнения отмечалось снижение способности к продукции ИФН-а в ответ на вирусные стимулы (в среднем до 57,3+/-2,6, и до 50,8+-4,3 соответственно при нормальных пределах 128-640, и в группе здоровых лиц - 148,5+/-9,3), хотя в среднем по изучаемым группам больных этот показатель не изменен (таблица 10).


Более чем у 40% больных основной группы выявлялось уменьшение способности к стимулированной продукции ИФН-гамма или "иммунного" интерферона. Например, в ответ на стимуляцию ФГА у этих пациентов продукция была 16.4+/-4,2, при норме 32-256). В группе сравнения у большинства больных стимулированная продукция ИФН – гамма была в пределах нормы.


Таблица 10. Динамика показателей интерферонового статуса у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией до и после лечения Баксином в основной группе(n=25) и в группе сравнения (n=23.).



* - достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


*** - достоверное различие между показателями групп , p<0,05


После терапии Баксином у больных основной группы содержание сывороточного ИФН в среднем по группе осталось на прежнем уровне.При этом его повышение сохранилось у 5 из 9 человек основной группы, нормализация - наблюдалась у 4-х из 9 пациентов.В тоже время у 5 человек основной группы с исходно нормальным уровнем сывороточного ИФН он повысился. По нашим данным, полученным в предшествующей работе («Изучение эффективности препарата Баксин у больных ВИД с воспалительными заболеваниями респираторного тракта», в котором проводили повторные исследования ИФН статуса в период приема препарата), оказалось, что применение Баксина стимулировало продукцию ИФН и соответственно, его повышение в крови - так называемого сывороточного ИФН, у больных с исходно сниженным содержанием его как на 7-й, так и на 21 дни лечения. В то время как у больных с исходно высоким уровнем сывороточного ИФН – была обнаружена тенденция к его нормализации. Эти данные могут отражать интерферон-индуцирующее действие Баксина.


У больных основной группы способность клеток к вирус-индуцированной продукции ИФН-альфа после лечения уменьшилась, но осталась в среднем в пределах нормы. Этот феномен может также косвенно отражать способность Баксина стимулировать продукцию ИФН, так как известно, что после лечения индукторами его синтеза временно уменьшается реактивность интерферон-продуцирующих клеток.


После окончания терапии Баксином в среднем по группе ФГА-индуцированная продукция ИФН-гамма не изменилась, однако при структурном анализе оказалось, что у 7 из 10 больных основной группы со значительным уменьшением способности к его продукции произошло восстановление до нормы этого важного показателя, отражающего преимущественно функциональную активность Т-хелперов 1-го типа.


Интересные данные получены при исследовании уровня продукции ИФН в ответ на медикаментозные стимуляторы (индукторы интерфероногенеза) в тестах in vitro до и после лечения Баксином (таблица 11).Подтвердились результаты упомянутого выше проведенного нами исследования, что препарат обладает интерферон-индуцирующим действием.Как видно из таблицы 11, Баксин в тестах in vitro вызывает у больных ВИД с ХГВИ синтез ИНФ на среднем уровне, сопоставимым с таковым при воздействии иммунофана и циклоферона.Кроме того, получены важные данные, о том, что применение Баксина в течение 1 месяца в изучаемой дозе не приводит к достоверному подавлению (развитию гипореактивности) интерферон-продуцирующих клеток в ответ на его повторное воздействие.


Таблица 11. Уровень продукции интерферона в тестах in vitro в ответ на медикаментозные стимуляторы у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией до и после лечения Баксином (n=…)


 


** - достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


Некоторое снижение ответа клеток на другие медикаментозные стимулы (дибазол, иммунофан, амиксин, циклоферон) незначительно и статистически недостоверно, а ответ интерферон-продуцентов не выходит за пределы нормальных значений.


При анализе параметров интерферонового статуса у больных, получавших Баксин, в зависимости от эффекта лечения были получены следующие данные (таблица 12).В подгруппе «А» (положительный эффект лечения) исходно почти у половины больных был повышен сывороточный ИФН (в среднем до 18,7+- ), у 4 из 14 чел выявлено снижение способности к стимулированной продукции ИНФ-альфа и у половины пациентов этой группы - снижение способности к ФГА-стимулированной продукции ИНФ-гамма.


В подгруппе «Б» (неполный или отсутствие эффекта от лечения) сывороточный ИФН был повышен только у 2-х из 10 человек, также у небольшого числа пациентов отмечалось подавление стимулированной продукции ИНФ-альфа и гамма (2 и 2 чел соответственно).Эти результаты обследования позволяют говорить о гипореактивности системы ИФН у больных подгруппы «Б», т.к. при сохранном ответе на внешние стимулы нет адекватного ответа системы ИФН на репликацию ВЭБ в организме.


После терапии Баксином у больных в подгруппе «А» сохраняется повышенный уровень сывороточного ИФН, то есть он активно продуцируется клетками в среднем в тех же величинах (20.6+-).


При этом у большинства больных с исходно сниженной способностью к стимулированной продукции ИФН-альфа и ИФН - гамма эти показатели восстанавливаются до нормы.


Таблица 12. Динамика показателей интерферонового статуса у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией до и после лечения Баксином в зависимости от эффекта терапии (в подгруппах «А» и «Б», n=15 и 10 соответственно)


 


*- достоверность различий по сравнению с показателями группы здоровых лиц, p<0,05


**-достоверное различие с исходными показателями, p<0,05


*** -достоверное различие между показателями подгрупп "А" и "Б", p<0,05


Другая картина после терапии наблюдается у больных подгруппы «Б».Сывороточный ИНФ повышен уже у большего числа пациентов, но незначительно и в среднем по группе его величина не отличается от показателей здоровых лиц.Но способность к стимулированной продукции ИФН-альфа снижается у большинства в пределах нормы (ближе к нижней границе), а у 4 из 10 пациентов этой группы она снижается значительно ниже нормы.


Однако способность к стимулированной продукции ИФН-гамма у всех больных этой группы после терапии сохраняется на оптимальном уровне (у больных с уменьшением этого показателя он восстанавливается до нормы).


Таким образом, в результате проведенных исследований было обнаружено, что Баксин обладает свойством индуцировать ИФН.Применение Баксина стимулировало продукцию сывороточного интерферона у больных с исходно сниженным содержанием его в сыворотке, в то время как у части больных с исходно высоким содержанием сывороточного интерферона наблюдалась нормализация данного показателя.Кроме того, у больных со сниженной способностью к стимулированной продукции ИФН-гамма, она восстанавливалась до нормальных пределов, т.е. Баксин оказывал иммуномодулирующее действие на систему ИФН.


Функциональная активность нейтрофилов у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией до и после лечения Баксином.


При исследовании функциональной способности нейтрофилов по ХЛ-тесту у половины больных основной группы и группы сравнения выявлены существенные отклонения от нормальных пределов как в сторону повышения, так и в сторону снижения активности клеток.При этом нередко наблюдалось изменение чувствительности нейтрофилов к стимулам, в частности, к имунокоректорам, выявляемое в тестах in vitro. Как правило, выявлялись или снижение ответа клеток на стимулы или развитие парадоксальной реакции нейтрофилов в виде угнетения, супрессии процессов перикисного окисления.


Однако после лечения Баксином у большинства больных с измененной функциональной активностью нейтрофилов она восстановилась до нормальной. Восстанавливалась и реакция нейтрофилов на медикаментозные стимулы.


Известно, что при длительном применении стимуляторов и в частности индукторов интерферона развивается гипореактивность клеток к повторному воздействию этого стимула


Таблица 13. Показатель функциональной активности нейтрофилов по Кхл (коэффициент хемилюминисценции) (n=25) у больных ВИД с хронической герпес-вирусной инфекцией до и после лечения Баксином



Важно отметить, что при применении Баксина в течение 28 дня сохранялся адекватный ответ нейтрофилов в тесте in vitro как на воздействие Баксина, так и других иммунокорректоров (тимоген, амиксин, циклоферон), т.е. гипореактивность клеток к действию медикаментозных стимулов (иммунокорректоров) не развивалась (табл. 13).


Выводы


 1. Применение препарата Баксин в виде монотерапии в течение 4-х недель у больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией в 72% случаев привело к подавлению ВЭБ инфекции в орофарингеальной области и в 54.5% случаев - в лимфоцитах периферической крови


2. Применение Баксина оказало положительное влияние на показатели гуморального звена иммунитета: отмечено достоверное увеличение продукции высокоавидных, т.е. функционально полноценных антител, у части больных увеличилась исходно сниженная продукция IgG.


3. У части больных с исходно сниженным уровнем Т-хелперов и цитотоксических лимфоцитов применение Баксина привело к нормализации этих показателей, восстановилась стимулированная продукция ИФН-гамма (Т-хелперами).


4. Баксин обладает свойством стимулировать продукцию ИФН лейкоцитами периферической крови в тестах in vitro, то есть является индуктором ИФН.


5. При применении Баксина в течение 28 дня сохранялся адекватный ответ нейтрофилов в тесте in vitro как на повторную стимуляцию Баксином, так и на воздействие других иммунокорректоров.


6. Применение Баксина стимулировало продукцию сывороточного интерферона у больных с исходно сниженным содержанием его в сыворотке, в то время как у части больных с исходно высоким содержанием сывороточного интерферона наблюдалась нормализация данного показателя.


7. После лечения Баксином у большинства больных измененная функциональная активностью нейтрофилов восстановилась до нормальной.


8. У больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией с выраженными изменениями Т-клеточного звена иммунитета, в частности, с уменьшеним числа Т-хелперов, применение Баксина привело к улучшению ряда параметров иммунного статуса, но не числа Т-хелперов и не сопровождалось подавлением репликации герпес-вирусов. Кроме того, у этих пациентов наблюдалось достоверное снижение уровня стимулированной продукции ИФН-альфа.


9. У больных ВИД с хронической герпесвирусной инфекцией, не получавших Баксин, наблюдалось усугубление лабораторных и клинических признаков ВИД и сохранялась репликация герпес-вирусов.


И.К. Малашенкова А.Н.Рославцева Ж.Ш.Сарсания О.А.Азизова 2001г.


Информация не должна использоваться для самолечения и не может служить заменой очной консультации врача.